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C56BL/6N与129S6/SvEvTac差异
C56BL/6N及129S6/SvEvTac。他们的区别在于: 129来源的ES培养相对容易,有较强的GLT潜力,即容易得到可遗传的F1代flox杂合子。但是,129品系的亚系非常多,遗传背景差异大,因此表型 差异也比较大,有研究 证明129品系不适合做神经学、免疫学等方面的研究。因此,用129背景做出来的敲除模型一般都需要回交到C57BL/6等清晰的近交系背景,这 需要5-10代,也就是2年左右的时间。 C57BL/6是应用最为广泛的近交系,遗传背景也很清晰,因此,在实验中的反应和表型更一致,得到的结果重复性也会更好。但是,相对于129品 系,C57BL/6来源的ES培养要求更高,而且GLT的能力较弱,比129背景更难得到可遗传的F1代杂合子。C57BL/6来源 的敲除模型直接与C57BL/6回交就是纯的近交系,不需要像129那样回交5-10代,因此,会节省时间。
C56BL/6J与B6CBF1差异
C56BL/6J及B6CBF1。他们的区别在于:B6CBF1是杂合背景,有杂交优势,生殖能力比较好;B6是纯背景的近交系, 繁育能力要弱一些,对于我们来说B6背景在制作转基因小鼠上技术难度会大一些,所以费用也相对贵一些。我们认为杂合背景可能对某些基因的表达会有一定影 响,而纯背景对基因表达的反应程度比较均一,也就是说不同背景对某些基因的表达的反应程度应该是不一样的,后期出现的表型可能也有区别。B6背景是目前国 际上运用的最广泛的小鼠,遗传背景非常清楚,公共数据库中的小鼠基因组全序列也是用 C57BL/6基因组为模板测出来的,您可以根据您的实验来选择品系背景。
常规敲除(Traditional KO或Conventional KO)
常规敲除(Traditional KO或Conventional KO)是通过同源重组技术,将基因组上的目的片段替换成一个Antibiotic Selection Marker,如PGK-Neomycin等。由于使用的neomycin标记两侧有loxp位点,即loxp-PGK-neomycin-loxp 结构,可以在中靶ES克隆中 表达Cre重组酶去除PGK-neomycin标记,当然,也可以选择在得到小鼠后,与全身表达Cre的小鼠交配的方式来去除这个标记。
国家遗传工程小鼠资源库
国家遗传工程小鼠资源库(NRCMM)是中国科技部唯一认证的遗传工程小鼠种子中心。资源库致力于小鼠遗传学研究和基因组改造技术的开发。已建立先进可靠 的小鼠基因修饰平台,包括基因敲除,基因敲入,转基因,ENU化学诱变等。NRCMM是中国现有的最大的小鼠品系保种中旬,包括多种疾病模型,如心血管, 肥胖,糖尿病,免疫缺陷,老年痴呆,肿瘤等模型,并成为我国最早获得AAALAC国际动物管理认证的国家级动物中心。我们连续3次通过了国际AAALAC 完全认证。目前已为国内数百家单位、包括多家跨国医药企业、大学、研究所、医院等成功制备了众多基因改造小鼠品系。2012年,NRCMM作为中国唯一一 家单位加入国际小鼠表型分析联盟(IMPC),并发起成立亚洲小鼠表型分析平台(AMPC),致力于建立标准化的小鼠表型分析平台。
基因敲入(knock in)
基因敲入(gene knock in)是利用基因同源重组,将外源有功能基因(基因组原先不存在、或已失活的基因),转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组,插入到基因组中,在细胞内获得表达的技术。
近交系
在动、植物中,通过亲代与子代重复杂交若干代而获得的遗传型相对纯一的纯系。近交系中,个体的性状会逐步趋于稳定一致,然而其生活力则降低。 指随着反复连续地近亲交配,具有不同性状的个体进行分离,成为基因纯合体系统。最终完成的近交系为纯系,由于其后代中所有性状不再分离,所以是精密实验的重要材料。
KO first敲除
KO first与conditional KO最大的不同在于neymycin标记的位置的元件更为复杂,是一个带有剪接受体位点的LacZ和Neomycin的合并体。这 样,neomycin作为筛选标记,功能与上述conditional KO中一致,LacZ就能够作为reporter在目的基因的promoter启动下,与目的基因一同表达,可以方便地对目的基因的表达进行定位。同样, 与Flpe表达品系交配可以删除lacZ-neo标记,转变成常规的conditional KO的flox小鼠。
清洁级动物
清洁级动物:清洁级动物在微生物控制方面,除要求必须不带有人兽共患病原和烈性传染病病原及常见传染病病原之外,还要求排除对科学实验研究干扰大的病原体的动物。
SPF级实验动物
无特定病原体(Specific pathogen Free,SPF)动物是指机体内无特定的微生物和寄生虫存在的动物,但非特定的微生物和寄生虫是容许存在的。一般指无传染病的健康动物,空气洁净度要求一万级,是目前国外使用最广泛的实验动物,它的来源,既可来自无菌动物繁育的后裔,亦可经剖胎取后,在隔离屏障设施的环境中,由SPF亲代动物抚育。它不带有对人或动物本身致病的微生物,但不能排除可经胎盘屏障垂直传播的微生物。
条件型敲除(Conditional KO)
条件型敲除(Conditional KO)策略是通过同源重组技术,在目的片段的两侧各引入一个loxp位点,其中,1st loxp是独立的loxp位点,2nd loxp位点旁边带有Neomycin标记,这里使用的PGK-neomycin两侧添加了FRT位点,即FRT-PGK-neomycin-FRT- loxp,可以在中靶ES克隆中表达Flpe重组酶去除PGK-neomycin标记,也可以在小鼠中完成,当然,也可以直接与组织特异性表达cre的品系交配,去除目的片段和筛选标记。
无菌级动物
所谓无菌动物,就是指不能检出任何活的微生物和寄生虫的动物。从微生物学的观点看,通常实验动物的体内和体外带有寄生虫,体内还常带有细菌和病毒,而且还都难于排除某些潜在的传染病。此外,普通实验动物的血清中含有抗体。所以用并存普通动物进行医学科学研究,将会存在各种各样的干扰,实验结果往往不确切。使用无菌动物作实验就可以克服普通实验所存在缺点,使实验结果正确可靠。
远交系
来自随机交配亲本、个体间遗传背景各异的小鼠。
转基因小鼠模型
对于普通的转基因,表达的区域将取决于启动子。如果选择全身表达的启动子,如Rosa26, CAG等,将得到全身表达的转基因小鼠;如果选择一些组织特异性表达的基因的启动子,将得到组织特异性表达的转基因小鼠,如在AP2的promoter启 动下进行表达,会得到脂肪组织特异表达的转基因小鼠。 需要特别说明的是,这种转基因的策略是将转基因片段直接注射到小鼠的受精卵中,转基因片段将会在小鼠基因组中进行随机插入,因为是完全随机的,有 可能会插入到一些抑制区导致转入的基因不表达,也有可能插入到一些增强区导致转入的基因高表达。通过原核注射的方法得到的第一代转基因小鼠称为 founder(首建鼠),由于上述随机性,每一只founder都是不一样的,以每一只founder起源的品系称为line,不同的line 之间的表达可能会有差异。
杂交系
指两个不同近交系之间进行有计划的交配,杂交所产生的第一代动物,具有两亲本遗传特性或产生新的遗传特性的动物。